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多磷酸化肽標記技術

蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)磷(lin)酸(suan)(suan)化(hua)(hua)(hua)是生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)界 普遍,也是 重要的(de)(de)(de)一種(zhong)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)翻(fan)譯后(hou)修(xiu)飾(shi),20世紀(ji)50年代以來一直被(bei)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)學家看作是一種(zhong)動(dong)態(tai)的(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)調(diao)(diao)節(jie)過(guo)程(cheng)。在細胞(bao)中,大概有1/3的(de)(de)(de)的(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)被(bei)認(ren)為是通(tong)過(guo)磷(lin)酸(suan)(suan)化(hua)(hua)(hua)修(xiu)飾(shi)的(de)(de)(de)。蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)磷(lin)酸(suan)(suan)化(hua)(hua)(hua)修(xiu)飾(shi)與多(duo)種(zhong)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)學過(guo)程(cheng)密(mi)切相關,如DNA損(sun)傷修(xiu)復、轉(zhuan)錄調(diao)(diao)節(jie)、信號傳導、細胞(bao)凋亡的(de)(de)(de)調(diao)(diao)節(jie)等(deng)。磷(lin)酸(suan)(suan)化(hua)(hua)(hua)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)及(ji)多(duo)肽的(de)(de)(de)研究可以幫(bang)助(zhu)人們闡述(shu)上述(shu)過(guo)程(cheng)的(de)(de)(de)機(ji)理,進一步認(ren)識生(sheng)(sheng)(sheng)命(ming)活動(dong)的(de)(de)(de)本質(zhi)(zhi)。近年來隨著(zhu)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)組技(ji)術的(de)(de)(de)不(bu)斷發展,蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)磷(lin)酸(suan)(suan)化(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)研究越來越受(shou)到廣泛的(de)(de)(de)關注。


蛋(dan)白質磷酸(suan)化在細胞信號轉導中的(de)作用

磷(lin)(lin)(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)(hua)多肽主(zhu)要(yao)(yao)指肽鏈中(zhong)(zhong)的(de)(de)Ser、Tyr和Thr殘(can)基的(de)(de)側(ce)(ce)鏈羥基被修(xiu)飾成(cheng)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)式磷(lin)(lin)(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)酯多肽。磷(lin)(lin)(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)(hua)多肽是(shi)(shi)研究(jiu)蛋白質磷(lin)(lin)(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)(hua)過程的(de)(de)必不可少的(de)(de)工具(ju),因此研究(jiu)蛋白質及多肽的(de)(de)磷(lin)(lin)(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)(hua)反應并確定成(cheng)熟簡便(bian)的(de)(de)合(he)成(cheng)路線(xian)就變(bian)得非常重要(yao)(yao)。目前為(wei)止,多肽的(de)(de)磷(lin)(lin)(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)(hua)修(xiu)飾主(zhu)要(yao)(yao)有后磷(lin)(lin)(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)(hua)法(fa)和單體(ti)法(fa)兩(liang)種合(he)成(cheng)方法(fa)。后磷(lin)(lin)(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)(hua)法(fa)是(shi)(shi)多肽序列(lie)在樹(shu)脂上合(he)成(cheng)完后,再對其中(zhong)(zhong)的(de)(de)Ser、Tyr或(huo)Thr的(de)(de)側(ce)(ce)鏈羥基進行磷(lin)(lin)(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)(hua);單體(ti)法(fa)則(ze)是(shi)(shi)將適當(dang)保護(hu)的(de)(de)磷(lin)(lin)(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)(hua)氨(an)基酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)直接引入到多肽序列(lie)中(zhong)(zhong),這種方法(fa)較后磷(lin)(lin)(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)(hua)法(fa)操作更為(wei)簡便(bian),已經成(cheng)為(wei)多肽磷(lin)(lin)(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)(hua)修(xiu)飾的(de)(de)主(zhu)要(yao)(yao)方法(fa)。

單體法修飾時,磷酸化的氨基酸由于側鏈修飾的較大基團產生的位阻而導致難以與肽鏈縮合,并且之后的氨基酸引入都會比較困難,尤其在含有多個磷酸化位點修飾時,合成將變得異常困難,并且 終產物成分復雜,難以分離,產率極低。因此,當肽鏈中多個位點進行磷酸化時,可以考慮采用后磷酸化法,其合成過程主要就是在多肽合成結束之后,選擇性的脫去要標記氨基酸的側鏈保護基,對于Tyr,Thr可以直接使用側鏈不保護的氨基酸進行反應。側鏈保護基在1% TFA/DCM條件下可以定量的脫除。后磷酸化時,可以采用雙芐基亞磷酰胺,四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體,連接到羥基上,然后在過氧酸條件下氧化生成磷酰基,完成反應。

我們提供多(duo)(duo)(duo)肽進行兩個(ge)(ge),三個(ge)(ge),四個(ge)(ge),五個(ge)(ge)磷(lin)酸(suan)化位(wei)點(dian)修飾的(de)高(gao)質量(liang)多(duo)(duo)(duo)肽。擁有(you)成熟的(de)合成純化技術,不斷進取的(de)精英(ying)團隊(dui),合生(sheng)(sheng)生(sheng)(sheng)工(gong)已經(jing)成為值(zhi)得(de)信賴的(de)多(duo)(duo)(duo)肽供應(ying)品牌。

成功案(an)例:

序列NH2-TERD(pS)D(pT)DVE****PPGRPAEVH***AQPFGFID(pS)D(pS)DA***Y-CONH2,四個磷酸(suan)化修(xiu)飾(shi)位點(dian)。

HPLC分析:



MS分(fen)析:

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