生物素標記多肽

在許多蛋(dan)白研(yan)究領(ling)域中，生物素標記(ji)肽通常與親和(he)素結合而被檢測或純化: 免疫(yi)印跡(ji)（WB）、ELISA、免疫(yi)沉淀 (IP)、

多肽親和(he)純化(hua)、免疫組化(hua) (IHC)、細胞(bao)表面標記、流式細胞(bao)術/熒光激活細胞(bao)分類(lei)(FACS)。

合生生物提供生(sheng)物素(su)標記(ji)肽合(he)成服務。通常，生(sheng)物素(su)可被(bei)標記(ji)在N端或(huo)C端(經(jing)由Lys)。我(wo)們推(tui)薦(jian)N端(duan)標記(ji)(ji)，其標記(ji)(ji)的成

功(gong)率更高，所需時間更短，操作(zuo)更簡潔。

生物(wu)素可(ke)通(tong)過各(ge)種不同(tong)的linker或(huo)spacers與(yu)多(duo)肽隔離(li)。一(yi)般建議(yi)引(yin)入間隔器如(ru)Ahx（一個(ge)6碳鏈接器)讓生物素更穩定

或更靈(ling)活。

合生生物提供N端或C端生物素標記：Biotin (N terminus), Lys(Biotin)(middle), Lys(Biotin)(C terminus)。

帶有linker(Ahx)的(de)生物素化: Biotin-Ahx (N terminus), Lys(Ahx-Biotin)(middle), Lys(Ahx-Biotin)(C terminus)。

生物素標記肽的Pull-down實驗方案(an)分析

生(sheng)物素標記肽(tai)可與親和素磁珠共軛以生(sheng)成(cheng)樹(shu)脂，用于(yu)肽(tai)pulldown試驗。先(xian)把生物素(su)標記肽上樣至Immobilized 

streptavidin beads (Pierce) 錨定有親和素的(de)磁珠(zhu)上，再(zai)與細(xi)胞(bao)(bao)裂解(jie)液孵育。細(xi)胞(bao)(bao)裂解(jie)于(yu)1％（v/v）Nonidet P-40, 

150 mM sodium chloride, 50 mM Tris-HCl, pH 7.5, protease inhibitors (Complete Tablets, Roche Applied

 Science), 加(jia)入 1 mM sodium orthovanadate作為磷(lin)酸酶(mei)抑制劑(ji)。等量的(de)蛋白質分別與被錨定的(de)多肽在4℃孵(fu)育6

小時。經(jing)過大量(liang)洗滌(di)，在SDS樣品buffer中煮沸，結合蛋白可從被錨定的多肽洗脫下來，或者，用50 mM 

dithiothreitol將多肽與蛋白復(fu)合(he)物從磁珠中斷開。將來自活性肽和對照目標肽pull-downs的洗(xi)脫液(ye)合(he)并，以作進(jin)一

步的分析。

上(shang)圖為鏈霉親和素-生物素(su)鍵力測(ce)量示意圖。由于它們(men)異常高(gao)的(de)親和(he)結(jie)合性，其(qi)中*突出的(de)配體-受體對是鏈(lian)霉

親和(he)素-生(sheng)物素（streptavidin-biotin）和(he)(he)親和(he)(he)素-生(sheng)物素（avidin-biotin）。 這兩種蛋白質都有一個四聚體(ti)的結構，

這樣他們可以結合4個配(pei)體。

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