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Fmoc固相多肽合成步驟示例:合成多肽ACDER

Fmoc固相多肽合成步驟示例:合成多肽ACDER

 1、合成CTC樹脂:稱取0.3g CTC Resin(如初始取代度約為1.0mmol/g)和0.4 mmol的Fmoc-Arg(Pbf)-OH于反應器中,加入適量DCM溶解氨基酸(需要注意,此時CTC樹脂體積會增大好幾倍,避免DCM溶液過少),再加入樹脂0.9 mmol的DIPEA((Mw:129.1,d:0.740g/ml)),反應2-3小時后,可不抽濾溶液,直接加入1ml的HPLC級甲醇,封端半小時。依次用DMF洗滌2次,甲醇洗滌1次,DCM洗滌一次,甲醇洗滌一次,DCM洗滌一次,DMF洗滌2次(這里使用甲醇和DCM交替洗滌,是為了更好地去除其他溶質,有利于后續反應)。得到Fmoc-Arg(Pbf)-CTC Resin備用。

 2、脫Fmoc:加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液,鼓氮氣30分鐘,然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到H2N-Arg(Pbf)-CTC Resin。(此步驟脫除Fmoc基團,茚三酮檢測為藍色)

 3、縮合:取2.7mol Fmoc-Glu(OtBu)-OH 氨基酸,加入到上述樹脂里,加適當DMF溶解氨基酸,再分別加入1.8mol DIPEA,1.67mol HBTU。反應30分鐘后,用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。(洗滌樹脂,去掉殘留溶劑,為下一步反應做準備)。得到Fmoc-Glu(OtBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:樹脂=3:6:2.85:1(摩爾比)。

 4、依次循環步驟二和步驟三,*終得到H2N-Ala-Cys(Trt)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin

5、切割:6倍樹脂體積的切割液(或每1g樹脂加8ml左右的切割液),搖床搖晃 2小時,過濾掉樹脂,用冰無水乙醚沉淀濾液,并用冰無水乙醚洗滌沉淀物3次,*后將沉淀物放真空干燥釜中,常溫干燥24小試,得到粗品 Ala-Cys-Asp-Glu-Arg
切割液選擇:

1)TFA:H2O=95%:5%、TFA:H2O=97.5%:2.5%
2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%
3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%
(前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。)


 6、純化凍干:使用液相色譜純化,收集目標峰液體,進行凍干,獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過這時要取小樣復測下純度 是否目標純度。

合肥合生生物專注于多肽合成方向研發十余年,從中也積累了豐富的多肽合成經驗,也屢次獲得合肥市嘉獎與表揚,如有多肽合成方面的需求,可以直接聯系小編VX:19956525566,也可百度搜索“合肥合生生物”。

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