NCI-H1299 人非小細胞肺癌細胞

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產品名稱: NCI-H1299 人非(fei)小細(xi)胞(bao)(bao)肺癌細(xi)胞(bao)(bao)
產品型號: HScell-h019
產品展商: 合生生工
產品文檔: 無相(xiang)關文檔

NCI-H1299 人非小細胞肺癌細胞  的詳細介紹

細胞介紹

這株細(xi)胞(bao)來源(yuan)于一個淋巴結轉移患者(zhe)。細(xi)胞(bao)均一性的部分缺失p53蛋(dan)(dan)白,并缺少p53蛋(dan)(dan)白表達(da)。 細(xi)胞(bao)可以(yi)合成0.1pmol/毫克(ke)蛋(dan)(dan)白的NMB蛋(dan)(dan)白,而不合成促胃(wei)液釋放肽(GRP)。

細胞特(te)性

1) 來源:肺(fei)癌;非小細胞肺(fei)癌;轉移(yi)灶(zao);淋巴(ba)結

2) 形態:上皮細(xi)胞樣 貼壁生長(chang)

3) 含量:>1x10^6  細胞數

4) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用(yong)途:僅供科(ke)研使用(yong)。

運輸和保存

干冰運(yun)輸及復蘇(su)好存活細胞

(1)1mL凍存(cun)管包裝(zhuang)干冰(bing)運輸,收(shou)到后-80度冰(bing)箱保(bao)存(cun)過夜后轉入(ru)液氮或(huo)直接復蘇,若發現干冰(bing)已揮(hui)發干凈、凍存(cun)管瓶(ping)蓋脫落、破損(sun)及細(xi)胞有污染(ran),請立即與我們聯系(xi)。

(2)T25瓶(ping)復蘇的存(cun)活細(xi)胞(bao)常溫發貨,收(shou)到后按(an)照(zhao)細(xi)胞(bao)接收(shou)后的處(chu)理方法操作。

細胞接收(shou)后的處理

1)收到細胞(bao)(bao)后(hou),75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yang)(yang)箱放置約2-3h,若發現培養(yang)(yang)瓶破(po)損、有液溢出及細胞(bao)(bao)有污染,請拍照(zhao)后(hou)及時(shi)聯系我們。

2)請(qing)在4或5X顯(xian)微(wei)鏡下(xia)確認細胞狀(zhuang)態,同時給剛收(shou)到的(de)細胞拍照(10×,20×)各(ge)2-3張(zhang)(zhang)以及(ji)培(pei)養(yang)瓶(ping)外觀照片一張(zhang)(zhang)留存,作為售(shou)后時收(shou)到時細胞狀(zhuang)態的(de)依(yi)據。

3)貼(tie)壁細(xi)(xi)(xi)胞:細(xi)(xi)(xi)胞在(zai)37℃培(pei)(pei)養(yang)箱中(zhong)放(fang)置(zhi)2-3h,顯微鏡下(xia)觀察(cha)細(xi)(xi)(xi)胞的(de)(de)生長和貼(tie)壁情(qing)(qing)況,有些貼(tie)壁細(xi)(xi)(xi)胞在(zai)快遞運送過程(cheng)中(zhong)會因振(zhen)動脫落(luo)(luo)和脫落(luo)(luo)后(hou)成團(tuan)的(de)(de)情(qing)(qing)況。若(ruo)(ruo)鏡下(xia)觀察(cha)細(xi)(xi)(xi)胞的(de)(de)生長密度若(ruo)(ruo)在(zai)60%以(yi)下(xia),可去除培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)灌液培(pei)(pei)養(yang)基(若(ruo)(ruo)有未貼(tie)壁的(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞需要離心(xin)(xin)回(hui)(hui)收,重(zhong)懸打入(ru)到(dao)原培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)),加入(ru)新配制(zhi)的(de)(de)完(wan)全培(pei)(pei)養(yang)基6-8mL,放(fang)到(dao)細(xi)(xi)(xi)胞培(pei)(pei)養(yang)箱中(zhong)繼(ji)續培(pei)(pei)養(yang)。若(ruo)(ruo)細(xi)(xi)(xi)胞生長密度達70%-80%以(yi)上(shang),可以(yi)對細(xi)(xi)(xi)胞進行(xing)傳代處理。傳代過程(cheng)中(zhong),若(ruo)(ruo)因運輸振(zhen)動脫落(luo)(luo)的(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞需要離心(xin)(xin)回(hui)(hui)收。

4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。  收到細胞后**次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。

一.培養(yang)基(ji)及(ji)培養(yang)凍存條(tiao)件準備(bei):

1)準備1640 基礎培養基                                                         86 %

      上等胎(tai)牛血清                                                                      10 %

      P/S青霉素(su)-鏈霉素(su)                                                             1%

      GlutaMAX-1谷氨酰胺               ;                                      1%

      HEPES 1M Buffer solution                                               1%

      Sodium Pyruvate丙(bing)酮酸(suan)鈉(na)                                               1%

      注(zhu)意:該細胞(bao)生長過程中培養基容易(yi)變黃需(xu)要及時換液。

2) 培養條(tiao)件(jian): 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度(du):37℃,培養箱濕(shi)度(du)為70%-80%。

3) 凍(dong)存液:90%血清,10%DMSO,現(xian)用現(xian)配。

二.細胞處理:

1) 凍(dong)存細胞的復蘇(su):

將(jiang)含有1mL細(xi)(xi)胞(bao)(bao)懸液的凍(dong)存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍(dong),加入(ru)到(dao)含4-6mL完(wan)全(quan)培(pei)養(yang)基(ji)(ji)的離心(xin)管中混合均勻。在1000RPM條件下(xia)離心(xin)3-5min,棄去上清液,完(wan)全(quan)培(pei)養(yang)基(ji)(ji)重懸細(xi)(xi)胞(bao)(bao)。然后將(jiang)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)懸液加入(ru)含6-8ml完(wan)全(quan)培(pei)養(yang)基(ji)(ji)的培(pei)養(yang)瓶(或皿)中37℃培(pei)養(yang)過夜。**天顯微鏡下(xia)觀察細(xi)(xi)胞(bao)(bao)生長情況和細(xi)(xi)胞(bao)(bao)密度。

2) 細(xi)胞傳代(dai):如果細(xi)胞密(mi)度達80%-90%,即可進行傳代(dai)培養。

對于貼壁細(xi)胞(bao)傳代可以參(can)考以下方法:

1. 棄去(qu)培養(yang)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(run)洗細胞(bao)1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰(yi)蛋白酶-0.53 mM EDTA于(yu)培(pei)(pei)養瓶中(zhong)(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于(yu)37℃培(pei)(pei)養箱中(zhong)消化(hua)1-2分(fen)鐘(難消化(hua)的細胞可以適當延(yan)長消化(hua)時間),然后在顯微鏡(jing)下觀(guan)察細胞消化(hua)情況,若細胞大部分(fen)變圓并脫落,迅(xun)速(su)拿回操作(zuo)臺,輕敲幾下培(pei)(pei)養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培(pei)(pei)養基(ji)來(lai)終止(zhi)消化(hua)。 

3.輕輕打勻后吸(xi)出(chu),在1000RPM條件下離(li)心3-5min,棄去(qu)上清液(ye),補加(jia)1-2mL培養(yang)(yang)液(ye)后吹勻。將細胞(bao)懸液(ye)按1:2的比例(li)分到新T25瓶中,添加(jia)6-8ml按照說明書要(yao)求配置(zhi)的新的完全培養(yang)(yang)基以保持細胞(bao)的生長活力,后續傳代根據實際(ji)情(qing)況按1:2~1:5的比例(li)進行。

3)細(xi)胞凍存(cun)(cun): 收到(dao)細(xi)胞后(hou)(hou)建議在培(pei)養前3代時凍存(cun)(cun)一批細(xi)胞種子以備后(hou)(hou)續(xu)實驗使用。

下面T25瓶為例(li);

1. 細(xi)胞(bao)凍(dong)存時按照細(xi)胞(bao)傳代的(de)過程收集消(xiao)化好的(de)細(xi)胞(bao)到離心管中,可(ke)使用血球(qiu)計數板計數,來決定細(xi)胞(bao)的(de)凍(dong)存密度。一般細(xi)胞(bao)的(de)推薦(jian)凍(dong)存密度為1×10^6~1×107個(ge)活細(xi)胞(bao)/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去(qu)掉(diao)上清。用配制好的細(xi)(xi)(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液重懸細(xi)(xi)(xi)胞(bao) ,按每1ml凍(dong)存(cun)液含1×10^6~1×107個活(huo)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)/ml分配到(dao)一個凍(dong)存(cun)管(guan)中將細(xi)(xi)(xi)胞(bao)分配到(dao)凍(dong)存(cun)管(guan)中,標(biao)注(zhu)好名稱(cheng)、代數、日期等信息(xi)。

3. 將要凍存(cun)的細胞置于程序降溫盒中(zhong),-80度(du)冰箱中(zhong)過夜,之后(hou)轉入液(ye)氮(dan)容器中(zhong)儲存(cun)。同時記錄好凍存(cun)管在液(ye)氮(dan)容器中(zhong)的位置以(yi)便后(hou)續查閱和使用(yong)。


注意事項(xiang)

1.收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。

2.收(shou)到細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)先不(bu)開瓶蓋,瓶身(shen)擦(ca)拭酒(jiu)精后放(fang)在培(pei)養箱靜置2-4小時(視細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)密度(du)而定)穩定細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)狀態。接著在倒置顯微鏡下(xia)(xia)觀察(cha)(cha)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)生長情況(kuang),并對細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)進(jin)行不(bu)同倍數(shu)拍(pai)照(建議收(shou)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)時就整體外(wai)觀拍(pai)一張照片,觀察(cha)(cha)培(pei)養基(ji)的顏色(se)和是(shi)否有(you)漏液情況(kuang),隨后在顯微鏡下(xia)(xia)拍(pai)下(xia)(xia)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)狀態,100*,200*各一張),觀察(cha)(cha)記錄細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)在運輸過程中是(shi)否有(you)污染情況(kuang)。作為我方進(jin)行銷售依據。

3.由于細(xi)(xi)胞(bao)狀態受(shou)環(huan)境(jing)、操作和(he)(he)運輸等(deng)多方面因素影響,故本公司只保證(zheng)客戶收到細(xi)(xi)胞(bao)后(hou)一周(zhou)內的細(xi)(xi)胞(bao)狀態,故客戶需要售后(hou)時(shi)需出示(shi)收到細(xi)(xi)胞(bao)的時(shi)間(jian)(jian)證(zheng)明(ming)及客戶提供收貨時(shi)間(jian)(jian)和(he)(he)發現問題(ti)后(hou)客服(fu)人員溝通的時(shi)間(jian)(jian)證(zheng)明(ming),期間(jian)(jian)間(jian)(jian)隔時(shi)間(jian)(jian)不能(neng)大(da)于7天(tian)。

4.所有動物細胞(bao)均視(shi)為有潛在(zai)的生物危害性(xing),必(bi)須在(zai)二級(ji)生物**臺內操作(zuo),并(bing)請注(zhu)意(yi)防護,所有廢(fei)液及接觸過此細胞(bao)的器皿(min)需(xu)要滅(mie)菌(jun)后方能(neng)丟棄。

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