NCI-H82 人小細胞肺癌細胞

細胞描述

原始(shi)腫瘤的(de)形態學不符(fu)合(he)小細(xi)(xi)胞(bao)肺(fei)癌（SCLC）的(de)特征。該(gai)(gai)細(xi)(xi)胞(bao)系在生(sheng)化和(he)形態學上是SCLC的(de)變(bian)(bian)種，表達神(shen)經元特異性(xing)烯(xi)醇(chun)酶和(he)肌酸(suan)激酶的(de)腦同工酶。它的(de)L-DOPA脫羧(suo)酶或蛙皮素的(de)表達量未達到可(ke)檢測水平。該(gai)(gai)細(xi)(xi)胞(bao)產生(sheng)一個(ge)異常大小的(de)p53 mRNA（3.7 kb）。該(gai)(gai)細(xi)(xi)胞(bao)的(de)C-myc DNA序(xu)列擴增約25倍，c-myc RNA比正(zheng)常細(xi)(xi)胞(bao)增加24倍。據(ju)報道該(gai)(gai)細(xi)(xi)胞(bao)表達功能性(xing)ANP受體，但(dan)用(yong)ANP處(chu)理不會改變(bian)(bian)其(qi)生(sheng)長方式。該(gai)(gai)細(xi)(xi)胞(bao)的(de)神(shen)經絲和(he)波形蛋(dan)白染色呈(cheng)陽性(xing)，表達v-fes，v-fms，Ha-ras，Ki-ras，N-ras和(he)c-raf 1 mRNA。經本(ben)庫(ku)STR檢測無誤，

STR鑒定結果為：
Amelogenin: X ,CSF1PO: 11,11, D13S317: 8,8, D16S539: 12,12,D5S818: 12,12,
D7S820: 10,13,TH01: 9,9.3,TPOX: 11,11,vWA: 14,14

細(xi)胞特(te)性

1） 來源：人  來源于(yu)轉(zhuan)移灶：胸(xiong)腔積液

2） 含(han)量：>1x10^6  細胞數 

3） 形態(tai)：上(shang)皮樣、懸(xuan)浮成團

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

運輸和保存

干(gan)冰運輸(shu)及復蘇好存活細胞(bao)

（1）1mL凍(dong)(dong)存(cun)管包裝干(gan)(gan)冰運(yun)輸(shu)，收到(dao)后(hou)-80度(du)冰箱(xiang)保存(cun)過夜后(hou)轉入液氮或直接(jie)復蘇，若發現干(gan)(gan)冰已揮發干(gan)(gan)凈、凍(dong)(dong)存(cun)管瓶蓋脫落、破損及(ji)細胞有污染，請立(li)即與我們聯系。

（2）T25瓶復蘇的存活細(xi)胞常(chang)溫發貨，收(shou)(shou)到后(hou)按照(zhao)細(xi)胞接(jie)收(shou)(shou)后(hou)的處理方法操作。

細胞接(jie)收后的處(chu)理

1） 收到細胞后，75%酒精(jing)消毒瓶(ping)壁(bi)將T25瓶(ping)置于37℃培養(yang)箱(xiang)放置約2-3h，若發現培養(yang)瓶(ping)破(po)損、有(you)(you)液溢(yi)出(chu)及細胞有(you)(you)污染，請(qing)拍照后及時聯系我們。

2）請在4或5X顯微鏡(jing)下確認(ren)細胞狀(zhuang)態(tai)，同(tong)時給(gei)剛(gang)收到(dao)的細胞拍照（10×，20×）各(ge)2-3張以及培(pei)養瓶(ping)外觀照片一張留存，作為售后時收到(dao)時細胞狀(zhuang)態(tai)的依據。

3） 懸浮細胞(bao)：T25瓶置于37℃培(pei)養箱放(fang)置約2-3h，然后抽(chou)出瓶中的培(pei)養基和細胞(bao)1000rpm離心5分鐘，棄(qi)去上清重懸后接種(zhong)到新的培(pei)養瓶中（加入按照說明(ming)書(shu)細胞(bao)培(pei)養條(tiao)件新配(pei)制的完全培(pei)養基）。

4）備注：運輸用(yong)的培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)（灌液培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)）不能再用(yong)來培(pei)(pei)養(yang)(yang)細(xi)(xi)胞(bao)，請換用(yong)按照說明(ming)書細(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養(yang)(yang)條(tiao)件新配制的完(wan)全培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)來培(pei)(pei)養(yang)(yang)細(xi)(xi)胞(bao)。  收(shou)到(dao)細(xi)(xi)胞(bao)后**次傳代建議T25培(pei)(pei)養(yang)(yang)瓶(ping)1：2傳代 。                      

一．培(pei)養(yang)基及培(pei)養(yang)凍(dong)存條件(jian)準備：

1） 準備RPMI-1640培養基                                87%

上等(deng)胎(tai)牛(niu)血清(qing)                                                       10%

GlutaMAX-1谷氨酰胺(an)                                         1%

Sodium Pyruvate丙(bing)酮(tong)酸鈉                                  1%

P/S青霉素(su)-鏈霉素(su)                                                 1%

備注：nci-h82 細(xi)胞(bao)懸浮(fu)聚(ju)集體(ti)(ti)，細(xi)胞(bao)以非常(chang)大的聚(ju)集體(ti)(ti)生(sheng)長，聚(ju)集體(ti)(ti)是**的活細(xi)胞(bao)群

2） 培(pei)養(yang)條件： 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；二氧化碳(tan)，5%。 溫度：37攝氏度，培(pei)養(yang)箱濕度為(wei)70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xian)用現(xian)配。

二． 細胞(bao)處理(li)：

1） 凍存(cun)細胞的(de)復(fu)蘇：

將含有1mL細(xi)胞(bao)(bao)懸液(ye)(ye)的凍存(cun)管(guan)在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入(ru)到含4-6mL完(wan)全培(pei)(pei)養(yang)(yang)基的離心(xin)管(guan)中混合均勻。在1000RPM條件下離心(xin)3-5min，棄去上清液(ye)(ye)，完(wan)全培(pei)(pei)養(yang)(yang)基重懸細(xi)胞(bao)(bao)。然后(hou)將細(xi)胞(bao)(bao)懸液(ye)(ye)加入(ru)含6-8ml完(wan)全培(pei)(pei)養(yang)(yang)基的培(pei)(pei)養(yang)(yang)瓶(ping)（或皿(min)）中37℃培(pei)(pei)養(yang)(yang)過(guo)夜。**天顯微鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞(bao)(bao)生長情況和細(xi)胞(bao)(bao)密度。

2） 細胞傳(chuan)代(dai)：如果(guo)細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan)代(dai)培養。

對(dui)于懸浮細胞，傳代(dai)可(ke)參考以下方法：

懸(xuan)(xuan)浮狀(zhuang)態(tai)下生長(chang)的(de)(de)(de)細(xi)(xi)胞，可(ke)以通過向培(pei)(pei)養瓶中添加(jia)完(wan)(wan)全培(pei)(pei)養基來維(wei)持(chi)(chi)細(xi)(xi)胞的(de)(de)(de)生長(chang)狀(zhuang)態(tai)，一般情況下細(xi)(xi)胞密(mi)度(du)維(wei)持(chi)(chi)在1×105~1×10^6個/mL（不同細(xi)(xi)胞對(dui)密(mi)度(du)要求(qiu)不同，）可(ke)以維(wei)持(chi)(chi)細(xi)(xi)胞的(de)(de)(de)正常(chang)生長(chang)。如需(xu)分(fen)瓶可(ke)以將(jiang)細(xi)(xi)胞懸(xuan)(xuan)液收集到(dao)離(li)心管(guan)中1000rpm，離(li)心5min，棄去上清，補加(jia)1-2mL培(pei)(pei)養液后(hou)(hou)重懸(xuan)(xuan)混(hun)勻后(hou)(hou)將(jiang)細(xi)(xi)胞懸(xuan)(xuan)液按1：2的(de)(de)(de)比例(li)分(fen)到(dao)新T25瓶中，添加(jia)6-8ml按照說明書要求(qiu)配置的(de)(de)(de)新的(de)(de)(de)完(wan)(wan)全培(pei)(pei)養基以保持(chi)(chi)細(xi)(xi)胞的(de)(de)(de)生長(chang)活力，后(hou)(hou)續傳代根(gen)據(ju)實(shi)際情況按1:2~1:5的(de)(de)(de)比例(li)進(jin)行。

3）細胞凍存(cun): 收到細胞后(hou)建議在培(pei)養前3代時凍存(cun)一批(pi)細胞種子(zi)以備后(hou)續實驗(yan)使用。

下面T25瓶(ping)為(wei)例；

1. 細(xi)(xi)胞凍存(cun)時按(an)照細(xi)(xi)胞傳代的過程收集消化好(hao)的細(xi)(xi)胞到離心管中，可使用血(xue)球計數板計數，來決定細(xi)(xi)胞的凍存(cun)密(mi)度。一般細(xi)(xi)胞的推薦凍存(cun)密(mi)度為1×10^6~1×107個(ge)活細(xi)(xi)胞/ml.

2. 1000rpm離(li)心3-5min，去掉上(shang)清(qing)。用配制好的細(xi)(xi)胞凍(dong)(dong)存液(ye)重懸(xuan)細(xi)(xi)胞 ，按每1ml凍(dong)(dong)存液(ye)含(han)1×10^6~1×107個活細(xi)(xi)胞/ml分(fen)配到一個凍(dong)(dong)存管中將(jiang)細(xi)(xi)胞分(fen)配到凍(dong)(dong)存管中，標注好名稱、代(dai)數、日期等(deng)信(xin)息。

3. 將要凍存(cun)(cun)的細胞置于程序降溫盒中(zhong)，-80度冰箱中(zhong)過夜，之后轉(zhuan)入液氮(dan)容器中(zhong)儲存(cun)(cun)。同(tong)時記錄好(hao)凍存(cun)(cun)管在(zai)液氮(dan)容器中(zhong)的位置以(yi)便后續(xu)查閱和使用。