PART 01
引言
多肽是由多個氨基酸（2≤N≤50）通過酰胺鍵連接形成的一類化合物，其分子大小介于小分子化藥和大分子生物藥之間。與小分子化藥相比，多肽具有更高的功效、選擇性和特異性以及更低的代謝毒性；與大分子生物藥比，多肽具有更低的免疫原性，能更深入的滲透到目標組織，且連續生產成本更低。基于這些獨特的優勢，近年來，多肽類藥物越來越受到關注，據統計，肽藥物市場的增長速度是其他藥物的兩倍，目前已有上千種肽類藥物進入市場，用于治療糖尿病、骨質疏松癥、癌癥、多發性硬化癥、慢性疼痛、HIV感染等多種疾病。在多肽藥物興起的初期，由于多肽藥物的特殊性，針對多肽藥物的指導原則并不多，且對多肽性質的了解也不夠深入。隨著多肽藥物數量的增加和對多肽性質理解的不斷加深，針對多肽的指導原則也在不斷地更新和擴充，美國和歐洲藥典中均有多個關于合成多肽原料藥(yao)(yao)(yao)質(zhi)量(liang)控(kong)制的(de)(de)(de)相(xiang)關(guan)章(zhang)節(jie)，2022年9月EMA發布了“關(guan)于(yu)(yu)(yu)制定合成(cheng)肽(tai)(tai)(tai)(tai)和(he)合成(cheng)寡核(he)苷酸研(yan)發生(sheng)產指南”的(de)(de)(de)概(gai)念文(wen)件，我國SFDA也(ye)于(yu)(yu)(yu)今年更新了《化(hua)學合成(cheng)多(duo)肽(tai)(tai)(tai)(tai)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)藥(yao)(yao)(yao)學研(yan)究技術指導(dao)原則》，這(zhe)些指導(dao)原則為我們進(jin)(jin)行多(duo)肽(tai)(tai)(tai)(tai)類藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)研(yan)發提(ti)供(gong)了重要(yao)的(de)(de)(de)參考和(he)指引。我們知道，活(huo)性肽(tai)(tai)(tai)(tai)是(shi)產生(sheng)藥(yao)(yao)(yao)效(xiao)的(de)(de)(de)物(wu)(wu)(wu)質(zhi)基礎，因此在肽(tai)(tai)(tai)(tai)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)開(kai)(kai)發過程中(zhong)，對活(huo)性肽(tai)(tai)(tai)(tai)（API）進(jin)(jin)行質(zhi)量(liang)控(kong)制是(shi)十(shi)分重要(yao)的(de)(de)(de)，而(er)肽(tai)(tai)(tai)(tai)相(xiang)關(guan)雜質(zhi)的(de)(de)(de)控(kong)制又是(shi)質(zhi)量(liang)控(kong)制的(de)(de)(de)重要(yao)工作，雜質(zhi)不僅(jin)影(ying)響(xiang)用于(yu)(yu)(yu)臨床試(shi)驗樣品的(de)(de)(de)質(zhi)量(liang)和(he)**性，在藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)發現(xian)的(de)(de)(de)早期(qi)階段，這(zhe)些雜質(zhi)還可(ke)能影(ying)響(xiang)藥(yao)(yao)(yao)效(xiao)的(de)(de)(de)判(pan)斷，雜質(zhi)研(yan)究不到位(wei)甚至可(ke)能導(dao)致錯誤的(de)(de)(de)結論。由于(yu)(yu)(yu)在國內外批準的(de)(de)(de)治療(liao)肽(tai)(tai)(tai)(tai)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)中(zhong)合成(cheng)多(duo)肽(tai)(tai)(tai)(tai)占(zhan)多(duo)數（大于(yu)(yu)(yu)70%），因此今天主要(yao)探討(tao)的(de)(de)(de)是(shi)合成(cheng)多(duo)肽(tai)(tai)(tai)(tai)的(de)(de)(de)相(xiang)關(guan)雜質(zhi)以(yi)及(ji)可(ke)能的(de)(de)(de)產生(sheng)途徑，以(yi)期(qi)對包(bao)裝、儲存條(tiao)件選擇及(ji)制劑(ji)**開(kai)(kai)發提(ti)供(gong)一定的(de)(de)(de)指導(dao)。
PART 02
雜質分類(lei)及產(chan)生途徑
2.1 合成過程相(xiang)關雜(za)質
化(hua)學(xue)合成(cheng)技術是多(duo)肽(tai)(tai)生產的(de)金標準，該工藝*初在(zai)溶液中(zhong)進行，后來引(yin)入了固相(xiang)肽(tai)(tai)合成(cheng)，固相(xiang)肽(tai)(tai)合成(cheng)一經問世(shi)就受到研發(fa)者的(de)偏愛，幾十年(nian)來不(bu)斷(duan)發(fa)展與成(cheng)熟，已(yi)穩(wen)坐化(hua)學(xue)合成(cheng)的(de)**把交椅。化(hua)學(xue)合成(cheng)多(duo)肽(tai)(tai)的(de)步驟包括：掛(gua)樹脂-去保護基(ji)-活化(hua)和(he)交聯(lian)-肽(tai)(tai)切(qie)割。在(zai)這(zhe)個過程中(zhong)去保護基(ji)和(he)活化(hua)與交聯(lian)的(de)步驟容易產生雜質(zhi)，通常是需要質(zhi)控的(de)點。
圖(tu)1 固相合成流程簡圖(tu)及相關雜質(zhi)的(de)產(chan)生途徑
1
缺失肽
顧名思義，缺(que)(que)失(shi)肽即(ji)是缺(que)(que)失(shi)一個或(huo)多(duo)(duo)個所(suo)(suo)(suo)需氨基酸(suan)的(de)(de)多(duo)(duo)肽，不(bu)完全去(qu)除氨基酸(suan)的(de)(de)瞬(shun)時保(bao)護集(ji)團、即(ji)將(jiang)結合的(de)(de)氨基酸(suan)活化(hua)不(bu)足(zu)或(huo)交聯(lian)效(xiao)率低(di)都會(hui)導致缺(que)(que)失(shi)肽的(de)(de)產生。缺(que)(que)失(shi)肽的(de)(de)鑒定方法，即(ji)質(zhi)譜中觀(guan)察到的(de)(de)雜(za)(za)(za)質(zhi)與(yu)目標肽之間的(de)(de)質(zhi)量(liang)(liang)(liang)差為(wei)所(suo)(suo)(suo)缺(que)(que)失(shi)氨基酸(suan)分子量(liang)(liang)(liang)減(jian)去(qu)水(shui)。例(li)如，某合成多(duo)(duo)肽藥物A目標分子量(liang)(liang)(liang)為(wei)1311.5，在(zai)樣品中檢測出分子量(liang)(liang)(liang)1103.5的(de)(de)雜(za)(za)(za)質(zhi)，與(yu)母(mu)肽分子量(liang)(liang)(liang)相(xiang)差208，初(chu)步推測至少缺(que)(que)失(shi)2個氨基酸(suan)，經過推算(suan)當缺(que)(que)失(shi)脯(fu)氨酸(suan)（分子量(liang)(liang)(liang)：115）及5-氧代(dai)脯(fu)氨酸(suan)（分子量(liang)(liang)(liang)：129）時所(suo)(suo)(suo)得雜(za)(za)(za)質(zhi)分子量(liang)(liang)(liang)=1311.5-115+18-129+18=1103.5，與(yu)所(suo)(suo)(suo)檢測到的(de)(de)該雜(za)(za)(za)質(zhi)質(zhi)荷(he)比相(xiang)符合。
圖(tu)2 某合成多肽藥物(wu)A的質譜圖(tu)
圖3 某合成多(duo)肽(tai)藥物A缺失肽(tai)的質譜圖
2
插入肽
在合成(cheng)多肽(tai)交聯(lian)過(guo)程中通(tong)常會(hui)將(jiang)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)過(guo)量(liang)投料，如(ru)(ru)果(guo)過(guo)量(liang)的(de)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)未被充分洗(xi)滌或者(zhe)反應(ying)時間(jian)過(guo)長會(hui)將(jiang)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)再次交聯(lian)，產生插入(ru)肽(tai)。對于插入(ru)肽(tai)的(de)鑒定方法，即質(zhi)(zhi)譜(pu)中觀察(cha)到的(de)雜質(zhi)(zhi)與(yu)目標肽(tai)之間(jian)的(de)質(zhi)(zhi)量(liang)差為所(suo)插入(ru)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)分子(zi)量(liang)減(jian)去(qu)水。例如(ru)(ru)：上(shang)述某合成(cheng)多肽(tai)藥物A目標分子(zi)量(liang)為1311.5，在樣品(pin)中檢測(ce)出分子(zi)量(liang)1474.9的(de)雜質(zhi)(zhi)，與(yu)母肽(tai)分子(zi)量(liang)相差163.4，初步推測(ce)插入(ru)酪氨(an)(an)酸(suan)，酪氨(an)(an)酸(suan)分子(zi)量(liang)為181，雜質(zhi)(zhi)分子(zi)量(liang)=1311.5+181-18=1474.5，與(yu)所(suo)檢測(ce)到的(de)該(gai)雜質(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)荷比相符合。
圖(tu)4 某合(he)成多肽藥(yao)物A插(cha)入肽的質譜圖(tu)
3
錯(cuo)結(jie)肽
當固相(xiang)反應過程(cheng)中既發生(sheng)氨(an)基酸缺失又發生(sheng)氨(an)基酸插入時就(jiu)會(hui)產生(sheng)錯結肽(tai)。
4
共價附著肽雜(za)質
在(zai)固相(xiang)合成(cheng)完成(cheng)后長(chang)久性保(bao)(bao)(bao)護(hu)基(ji)(ji)團不(bu)完全去除將導致保(bao)(bao)(bao)護(hu)基(ji)(ji)共(gong)價(jia)附(fu)著在(zai)肽序列中(zhong)，產生共(gong)價(jia)附(fu)著肽雜(za)質(zhi)。對于這類雜(za)質(zhi)的鑒定方(fang)法，如(ru)果質(zhi)譜中(zhong)雜(za)質(zhi)分子量與(yu)(yu)目標肽分子量相(xiang)差(cha)56 Da，那么(me)(me)附(fu)著的保(bao)(bao)(bao)護(hu)基(ji)(ji)為(wei)tBu保(bao)(bao)(bao)護(hu)基(ji)(ji)，如(ru)果質(zhi)譜中(zhong)雜(za)質(zhi)分子量與(yu)(yu)目標肽分子量相(xiang)差(cha)100 Da，那么(me)(me)附(fu)著的保(bao)(bao)(bao)護(hu)基(ji)(ji)為(wei)tBoc-TCS保(bao)(bao)(bao)護(hu)基(ji)(ji)。
2.2 降(jiang)解相關雜質(zhi)
降(jiang)解(jie)相關雜質(zhi)包括(kuo)制造(zao)過(guo)程(cheng)(cheng)中(zhong)(zhong)通過(guo)降(jiang)解(jie)機(ji)制形(xing)成(cheng)的(de)雜質(zhi)和(he)儲存過(guo)程(cheng)(cheng)中(zhong)(zhong)通過(guo)降(jiang)解(jie)機(ji)制形(xing)成(cheng)的(de)雜質(zhi)。引起多肽(tai)(tai)不穩定的(de)因素包括(kuo)氧化(hua)、光照(zhao)、高溫、pH、離子強度變化(hua)及(ji)吸(xi)附等(deng)，肽(tai)(tai)鏈中(zhong)(zhong)氨基酸種類及(ji)氨基酸所在的(de)位置對多肽(tai)(tai)的(de)穩定性(xing)(xing)有重要影響。因穩定性(xing)(xing)而產生的(de)肽(tai)(tai)雜質(zhi)包括(kuo)：
1
差(cha)向肽
差(cha)向肽是(shi)指(zhi)序列中(zhong)含(han)有1個(ge)或多(duo)個(ge)非預(yu)期(qi)手(shou)性(xing)(xing)構(gou)型的氨基(ji)(ji)酸(suan)殘基(ji)(ji)所(suo)形成(cheng)的雜(za)質(zhi)，其產生可(ke)能源于起(qi)始物(wu)料中(zhong)的光學異(yi)構(gou)體(ti)，也可(ke)能是(shi)合成(cheng)過(guo)程中(zhong)氨基(ji)(ji)酸(suan)手(shou)性(xing)(xing)中(zhong)心烯醇(chun)化或氮雜(za)內酯(zhi)化形成(cheng)。差(cha)向肽雜(za)質(zhi)的色譜(pu)行為與(yu)主成(cheng)分(fen)非常(chang)接近，分(fen)子量也與(yu)主成(cheng)分(fen)一樣(yang)，僅此分(fen)離和鑒(jian)定(ding)難度較大(da)。可(ke)采用氘(dao)代試劑(ji)對(dui)多(duo)肽進行水解(jie)(jie)并衍(yan)生化處理(li)，通過(guo)水解(jie)(jie)所(suo)得氨基(ji)(ji)酸(suan)的手(shou)性(xing)(xing)異(yi)構(gou)體(ti)的含(han)量判(pan)斷肽鏈(lian)中(zhong)易發(fa)生消旋的氨基(ji)(ji)酸(suan)，通過(guo)定(ding)向制備可(ke)能的差(cha)向異(yi)構(gou)體(ti)肽進行有針對(dui)性(xing)(xing)的研究(jiu)。
圖5 差(cha)向肽形成機(ji)制（A）烯醇化（B）氮雜內脂化
2
缺失肽（斷裂肽）
此(ci)處的(de)缺失肽(tai)(tai)與合成過程中的(de)缺失肽(tai)(tai)不同，此(ci)處主要(yao)是(shi)指斷裂肽(tai)(tai)。多肽(tai)(tai)化合物在遇到高溫或pH變化時(shi)可能發生肽(tai)(tai)鍵(jian)斷裂，產生斷裂肽(tai)(tai)，有研(yan)究(jiu)表明堿性條件*易(yi)引起肽(tai)(tai)鍵(jian)斷裂。斷裂肽(tai)(tai)的(de)鑒定相(xiang)對簡單，通過雜質與母肽(tai)(tai)的(de)分子量差可以推斷是(shi)哪個酰胺鍵(jian)斷裂。
3
脫酰胺雜質
當多肽中含(han)有(you)谷氨(an)酰(xian)胺或(huo)天冬酰(xian)胺殘(can)基時，可能脫去酰(xian)胺鍵(jian)形(xing)(xing)成(cheng)谷氨(an)酸或(huo)天冬氨(an)酸殘(can)基，形(xing)(xing)成(cheng)的(de)機制有(you)兩種，一是(shi)直(zhi)接水解（pH<5時容易(yi)(yi)發生），二是(shi)通(tong)過(guo)β轉變(bian)（堿性(xing)條件下易(yi)(yi)發生），β轉變(bian)通(tong)過(guo)主鏈(lian)中酰(xian)胺鍵(jian)的(de)N原子攻擊(ji)側鏈(lian)上的(de)羰(tang)基，形(xing)(xing)成(cheng)琥珀酰(xian)亞胺環（氮雜(za)內酯的(de)一種），在堿性(xing)或(huo)中性(xing)條件下水解形(xing)(xing)成(cheng)羧(suo)基。琥珀酰(xian)亞胺水解過(guo)程往(wang)往(wang)還伴(ban)隨著兩個副(fu)反(fan)應即異構化(hua)和外消旋化(hua)，*終形(xing)(xing)成(cheng)4個分子量相同的(de)異構體產(chan)物(wu)。脫酰(xian)胺雜(za)質(zhi)的(de)鑒(jian)定主要(yao)通(tong)過(guo)質(zhi)譜，檢測到分子量+1 Da的(de)雜(za)質(zhi)通(tong)常是(shi)脫酰(xian)胺雜(za)質(zhi)。
圖6天冬酰(xian)胺(an)脫(tuo)酰(xian)胺(an)雜質產(chan)生機制
4
異(yi)構(gou)化雜(za)質
天冬(dong)氨(an)(an)酸是(shi)容易(yi)(yi)產生(sheng)異(yi)構化(hua)的(de)氨(an)(an)基酸，天冬(dong)氨(an)(an)酸容易(yi)(yi)因側鏈失水或氨(an)(an)而環(huan)化(hua)到(dao)主鏈，形成琥珀酰亞胺(an)，琥珀酰亞胺(an)穩定性較差(cha)，易(yi)(yi)水解開(kai)環(huan)，在開(kai)環(huan)的(de)過(guo)程可形成異(yi)構體，同時還會產生(sheng)差(cha)向肽(tai)副產物，其生(sheng)成機制與天冬(dong)酰胺(an)脫酰胺(an)相(xiang)似。
圖7天冬氨酸相關雜質產生機制
二嗪哌酮(tong)是(shi)指N端活性基團（通常為氨基）進攻β位(wei)(wei)主鏈酰胺(an)鍵的羰基，形成二酮(tong)哌嗪類似物，得到缺失兩個氨基酸的缺失肽(tai)，當(dang)N端氨基酸位(wei)(wei)阻(zu)較小時反應更容(rong)易發生(sheng)。
圖(tu)8 二嗪哌酮雜質產生(sheng)機制
焦谷(gu)氨酸是指N-端含(han)有的谷(gu)氨酸發生環化形(xing)成吡咯烷酮羧酸。該雜質的鑒定可采(cai)用質譜，分子量較母肽減少17Da（脫去NH3）。
圖9 焦谷(gu)氨酸相關(guan)雜質產生機制
6
聚合物
多肽(tai)分子間(jian)(jian)聚(ju)(ju)(ju)集和(he)(he)自結(jie)合(he)(he)(he)(he)可導致(zhi)高分子量雜質也就是(shi)(shi)聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)(he)(he)物(wu)的形成(cheng)。聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)(he)(he)機制(zhi)有共價(jia)和(he)(he)非共價(jia)兩種，非共價(jia)聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)(he)(he)通(tong)過(guo)靜電或(huo)疏水相(xiang)互作用(yong)形成(cheng)，是(shi)(shi)一(yi)種中間(jian)(jian)狀態，當溶(rong)液濃(nong)度、pH或(huo)離子強(qiang)度發生變(bian)化時，這(zhe)種作用(yong)力容易減(jian)弱或(huo)消(xiao)失，聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)(he)(he)狀態恢復到(dao)單(dan)體狀態；當肽(tai)鏈中含(han)有巰基或(huo)酪氨酸(suan)時可通(tong)過(guo)生成(cheng)二硫鍵或(huo)形成(cheng)二酪氨酸(suan)而引起共價(jia)聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)(he)(he)，共價(jia)聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)(he)(he)是(shi)(shi)一(yi)種穩定的聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)(he)(he)狀態，不會隨肽(tai)濃(nong)度或(huo)pH、離子強(qiang)度等而改變(bian)聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)(he)(he)狀態。聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)(he)(he)物(wu)雜質由于其(qi)分子量和(he)(he)體積的進一(yi)步(bu)加(jia)大，容易增加(jia)免疫(yi)原(yuan)性，引起過(guo)敏性反(fan)應，因(yin)此應合(he)(he)(he)(he)理控制(zhi)聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)(he)(he)物(wu)的含(han)量。聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)(he)(he)物(wu)的檢測通(tong)常采用(yong)體積排(pai)阻色譜(pu)，與質譜(pu)聯(lian)用(yong)后可以判斷(duan)其(qi)聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)(he)(he)體的倍數(shu)。
7
氧化(hua)雜(za)質(zhi)
氧(yang)(yang)(yang)化(hua)(hua)雜(za)(za)質(zhi)是(shi)多肽(tai)在儲(chu)存過(guo)程(cheng)中接(jie)觸氧(yang)(yang)(yang)氣和光的(de)情況(kuang)下(xia)形成(cheng)的(de)，易(yi)(yi)發生(sheng)氧(yang)(yang)(yang)化(hua)(hua)的(de)氨(an)(an)基(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)包括含硫(liu)氨(an)(an)基(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、組氨(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、酪氨(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、色(se)(se)氨(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)。①含有(you)硫(liu)的(de)氨(an)(an)基(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)（甲(jia)硫(liu)氨(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、半胱氨(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、胱氨(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)）容易(yi)(yi)發生(sheng)氧(yang)(yang)(yang)化(hua)(hua)反應，氧(yang)(yang)(yang)化(hua)(hua)途徑(jing)有(you)兩種，一(yi)是(shi)生(sheng)成(cheng)二(er)(er)(er)硫(liu)鍵，雜(za)(za)質(zhi)分(fen)子(zi)量(liang)為母肽(tai)分(fen)子(zi)量(liang)2倍減2，二(er)(er)(er)者(zhe)生(sheng)成(cheng)亞砜(feng)(feng)、砜(feng)(feng)和磺酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，雜(za)(za)質(zhi)分(fen)子(zi)量(liang)與母肽(tai)的(de)分(fen)子(zi)量(liang)通常相(xiang)差16Da、32Da或(huo)48Da（圖(tu)10 A、B）。②酪氨(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)中酚羥基(ji)及臨位均可成(cheng)為氧(yang)(yang)(yang)化(hua)(hua)位點，氧(yang)(yang)(yang)化(hua)(hua)會生(sheng)成(cheng)2-氨(an)(an)基(ji)-3-(3,4-二(er)(er)(er)氧(yang)(yang)(yang)環(huan)己-1,5-二(er)(er)(er)烯基(ji))丙酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，分(fen)子(zi)量(liang)增(zeng)(zeng)加(jia)14（圖(tu)10 C）。③組氨(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)氧(yang)(yang)(yang)化(hua)(hua)有(you)兩種途徑(jing)，一(yi)是(shi)咪唑環(huan)的(de)雙鍵氧(yang)(yang)(yang)化(hua)(hua)成(cheng)羰基(ji)，其氧(yang)(yang)(yang)化(hua)(hua)雜(za)(za)質(zhi)與母肽(tai)分(fen)子(zi)量(liang)相(xiang)差16Da，另一(yi)種氧(yang)(yang)(yang)化(hua)(hua)途徑(jing)是(shi)生(sheng)成(cheng)n -甲(jia)酰基(ji)犬(quan)(quan)尿(niao)氨(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，分(fen)子(zi)量(liang)相(xiang)差48（圖(tu)10 D）。④色(se)(se)氨(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)在氧(yang)(yang)(yang)化(hua)(hua)條件下(xia)可生(sheng)成(cheng)羥色(se)(se)氨(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)（分(fen)子(zi)量(liang)增(zeng)(zeng)加(jia)16Da）或(huo)犬(quan)(quan)色(se)(se)氨(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)（分(fen)子(zi)量(liang)增(zeng)(zeng)加(jia)4Da），犬(quan)(quan)色(se)(se)氨(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)進(jin)一(yi)步氧(yang)(yang)(yang)化(hua)(hua)可生(sheng)成(cheng)羥基(ji)-甲(jia)酰犬(quan)(quan)尿(niao)氨(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)（分(fen)子(zi)量(liang)增(zeng)(zeng)加(jia)48Da）（圖(tu)10 E）。
圖10 多肽(tai)氧化的降(jiang)解機制(zhi)
8
其他雜質
多肽除發生以上降解外還會在還原劑存在的條件下發生還原反應，如二硫鍵還原為巰基，這一反應與相應的氧化反應形成動態平衡。此外，物理不穩定性也是需要關注的問題，如與包材、濾膜等發生吸附或當多肽分子微環境發生變化時其**結構發生改變等，這些都可能引起藥效改變或產生**性的風險。PART 03
小結
多肽(tai)的(de)肽(tai)相關雜(za)(za)質(zhi)不僅是藥(yao)(yao)物開(kai)發和(he)生產過程中GMP監管需(xu)要持續關注的(de)問題，在藥(yao)(yao)物發現和(he)開(kai)發的(de)早(zao)期(qi)階段還可能因為雜(za)(za)質(zhi)的(de)拮抗作用(yong)或超強的(de)藥(yao)(yao)效(xiao)引起研發者的(de)誤判，因此通常在開(kai)展生物試驗時，建議采用(yong)不同來源的(de)肽(tai)進行(xing)復測，以排除(chu)雜(za)(za)質(zhi)對藥(yao)(yao)效(xiao)的(de)影響。
合(he)成過(guo)(guo)程(cheng)相(xiang)關的(de)(de)(de)肽(tai)(tai)(tai)(tai)雜質(zhi)包括fmoc脫(tuo)保護效(xiao)率(lv)低(di)下、氨(an)基(ji)酸活(huo)化(hua)不足或交聯效(xiao)率(lv)低(di)下、氨(an)基(ji)酸過(guo)(guo)量或反應時間(jian)過(guo)(guo)長引起的(de)(de)(de)缺失肽(tai)(tai)(tai)(tai)、插入肽(tai)(tai)(tai)(tai)。與穩(wen)定(ding)性相(xiang)關的(de)(de)(de)雜質(zhi)包括差向肽(tai)(tai)(tai)(tai)、斷裂肽(tai)(tai)(tai)(tai)、脫(tuo)酰胺雜質(zhi)、異(yi)構化(hua)雜質(zhi)、聚合(he)物、二嗪哌酮和焦谷氨(an)酸、氧(yang)化(hua)等(deng)。了解多(duo)肽(tai)(tai)(tai)(tai)類藥物雜質(zhi)產生的(de)(de)(de)原因，我(wo)們(men)不僅(jin)可以對(dui)容(rong)易產生雜質(zhi)的(de)(de)(de)合(he)成步驟(zou)進行監控(kong)，在(zai)后續(xu)制劑**設(she)計和儲存(cun)過(guo)(guo)程(cheng)中我(wo)們(men)也(ye)可依(yi)據由于多(duo)肽(tai)(tai)(tai)(tai)不穩(wen)定(ding)所產生雜質(zhi)的(de)(de)(de)產生機制有針對(dui)性的(de)(de)(de)設(she)計**工藝和儲存(cun)條件，確保多(duo)肽(tai)(tai)(tai)(tai)藥物的(de)(de)(de)質(zhi)量在(zai)可接受范圍內。